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怎样配制母液和培养基?

发布日期:2020-02-22 19:58:55  来源:好鲜生  作者:qk   
配制培养基是花卉组织培养的首要环节。培养基的成分随着花卉的种类.不同的外植休不同的培养阶段应当有所不同一般来说.各种培养

配制培养基是花卉组织培养的首要环节。培养基的成分随着花卉的种类.不同的外植休不同的培养阶段应当有所不同一般来说.各种培养基都有大量元素.微量元素.维生素.激素.糖和琼脂等物质.有时还要在培养基里添加有加物,如活性炭香蕉汁,椰子汁等在生产上首先选用已有的培养基配方它是前人研究的成果.又是经过生产实践验证的成在几乎各种花卉用的营养基配方都有,可以免去再研究的麻烦,当然在生产实践中,也可适当改进.如果找不到合适的配方,可先试用MS培养基,MS是 Murashige和Skoog的缩写 ,他们二人于1962年研究出来了这种培养基。下面以NS培养基为例介绍如何配制。  

(1)配制母液。把培养基m的必需元素按原配方量的50倍/100倍或1000倍称量后制成一种浓溶液,这种浓溶液叫母液在配制培养基时按比例分别量取母液稀释到所需的浓度即可母液配好后贴上标签,放在0~4℃的冰箱中可使用半年到1年,这样傲可节省许多时间可能产生化学反应的或溶解后产生沉淀的不能放在同一个容器m配制母液要用重蒸馏水药物要使用分析纯或等级较高的化学纯药物的称量和药液的定容都要准确。

母液①:硫酸镁18.5克.硝酸铵82.5克.硝酸钾95.0克;加水定容到1000毫升,浓度为培养基的50倍,配1升培养基时量取20毫升母液

母液②:氯化钙22.0克加水定容到500毫升,浓度为培养基的100倍,配1升培养基时量取10毫升母液 

母液③:磷酸二氢钾8.5克加水定容到500毫升,浓度为培养基的100倍,配1升培养基时量取10毫升母液。

母液④;乙二胺四乙酸二钠3.73克硫酸亚铁2.78克,加水定容到1000毫升,浓度为培养基的100倍,配1升培养基时量取10毫升母液

母液⑤:硼酸620毫克,硫酸锰2230毫克,硫酸锌860毫克,硫酸铜2.5毫克,碘化钾83毫克,钼酸钠25毫克,氯化钴2.5毫克,加水定容到1000毫升,浓度为培养基的100信,配1升培养基时量取10毫升母液。

母液⑥:肌醇5克,甘氨酸100毫克,烟酸25毫克,盐酸吡哆醇25毫克,盐酸硫胺素5毫克,加水定容到500毫升,浓度为培养基的100倍,配1升培养基时量取10毫升母液  WWW.guOsHu123.cN

(2)配制培养基。配制每1000毫升培养基.称取6~10克琼:脂作凝固剂,具体按配方要求称量,放在水浴锅上慢慢溶解,先在量筒内放入一定量的水,按照母液顺序和规定量,量取母液,当母液加完后,根据需要每升培养基再加入生长调节物质如吲哚乙酸或萘乙酸等,细胞分裂素类0.04~10毫克,细胞分裂素应用最多的是6-苄基腺嘌呤,加完后倒入已熔化的琼脂中,每1000毫升培养基加入蔗糖30克或根据要求确定,定容到所需的体积,继续加温,直到琼脂完全熔解,用盐酸或氢氧化钠对培养基的pH进行调节,多数培养基的pH在5.4~6.0,MS培养基的pH为5.7。

将配好的培养基趁热倒入培养容器中,培养基占容器体积的1/4~1/3不要将培养基沾到容器壁上,否则容易被杂菌感染,然后及时加盖,进行高压灭菌,灭菌时要按高压灭菌锅的操作规程使用.在121℃、压力111千帕下维持15~20分钟,温度和时间都要严格控制,到时间后立即切断电源,当高压锅内压力降到常压后,开启放气阀,打开锅盖,取出灭菌好的培养基,放在接种室中培养3天,没被感染后才能用来组织培养

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关键词: 培养基
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